Изменение фенотипа лимфоцитов периферической крови здоровых и больных ишемической болезнью сердца при экзогенной гипергомоцистеинемии

Аннотация

Цель исследования – изучение изменения фенотипа лимфоцитов периферической крови под влиянием гомоцистеина и гомоцистеина-тиолактона в краткосрочной культуре клеток. Методика. Исследована венозная кровь 15 относительно здоровых, некурящих добровольцев – мужчин в возрасте 30 – 40 лет и 16 больных ишемической болезнью сердца (стабильная стенокардия 2-го функционального класса) сопоставимых по возрасту с донорами. Кровь брали из локтевой вены в пробирки с добавлением антикоагулянта – гепарина Li. В 3 стерильные пластиковые пробирки, содержащие по 1 мл крови, добавляли по 1 мл культуральной среды RPMI-1640 (Miltenyi BiotecGmbH, Германия) с 10% содержанием сыворотки, в 2 из них вносили растворы либо гомоцистеина (50 мкмоль/л), либо гомоцистеин-тиолактона (50 нмоль/л). 3-я и 4-я (контрольные) пробирки содержали эквивалентный объем физиологического раствора или культуральной среды. Фенотип лейкоцитов определяли после 4-х-часовой инкубации в 4,8% СО₂ при 37 ºС. Результаты. Общее количество лейкоцитов, моноцитов и нейтрофилов в исследуемых группах не имело значимых различий. Было зафиксировано лишь увеличение содержания лимфоцитов в образцах периферической крови больных ишемической болезнью сердца за счет увеличения числа всех субпопуляций лимфоцитов. При изучении фенотипа лимфоцитов в культуре под воздействием высоких доз гомоцистеина и гомоцистеина-тиолактона количественные сдвиги наблюдались только в субпопуляции Т-лимфоцитов: в образцах крови условно здоровых добровольцев наблюдалось снижение количества Т-лимфоцитов за счет фракции Т-хелперов. В пробах больных ишемической болезнью сердца под воздействием гипергомоцистеинемии число Т-лимфоцитов не имело значимых различий по сравнению с контролем, но при этом содержание Т-хелперов снижалось на 20%, так же, как в образцах крови условно здоровых добровольцев. Уровень цитотоксических лимфоцитов при добавлении гомоцистеина в культуру клеток условно здоровых добровольцев увеличивался на 50%, а при добавлении гомоцистеина-тиолактона – практически в 2 раза, в то же время у больных ишемической болезнью сердца эта фракция лимфоцитов увеличивалась на 70% как под воздействием гомоцистеина, так и гомоцистеина-тиолактона. Заключение. Высокие дозы гомоцистеина снижают количество Т-хелперов и увеличивают число цитотоксических лимфоцитов. Изменения более выражены в образцах крови лиц, страдающих атеросклерозом. Механизмы развития данного феномена требуют дальнейшего изучения.