Дестабилаза-лизоцим-2, оригинальный рекомбинантный тромболитический препарат медицинской пиявки, ингибирует агрегацию тромбоцитов лошади

Аннотация

Полученные результаты свидетельствуют о том, что оригинальный рекомбинантный тромболитический препарат Дестбилаза-Лизоцим-2 медицинской пиявки, gene ds2(mlDL-Ds2,более чем на 40% ингибирует АДФ-стимулированную PRP агрегацию тромбоцитов лошади. Отмечено ингибирование этим препаратом АДФ стимулированной агрегации отмытых тромбоцитов. Цель исследования — оценка способности нового оригинального рекомбинантного тромболитического препарата Дестбилаза-Лизоцим-2 медицинской пиявки ингибировать агрегацию тромбоцитов. Методика. Выделение рекомбинантного белка Дестабилазы-Лизоцима-2, ген которого (ds2 (mlDL-Ds2))клонировали в клетках E.coli, проводили в денатурирующих условиях с использованием металло-хелатной хроматографии с последующей ренатурацией полипептида путем быстрого разбавления в точном соответствии с методикой, описанной в работе Курдюмова А.С. и соавторов (Биоорган. химия (2016) Т.42, С.50–61). Кровь брали из яремной вены лошадей. Исследовали богатую тромбоцитами плазму (Platelet Rich Plasma, PRP) и суспензию отмытых тромбоцитов (Washed Platelets, WP) 18 лошадей. Функциональное состояние тромбоцитов оценивали по их агрегации в PRP и в суспензии WP c помощью двухканальных агрегометров Chrono-Log-700 и Сhrono-Log 560, США. В качестве индукторов агрегации использовали АДФ, коллаген III типа и тромбин крови человека. Результаты. Впервые продемонстрирована способность вновь синтезированного (см. Курдюмов А.С. и др. (2016) Биоорган. химия, Т.42, С.50–61) тромболитического рекомбинантного фермента Дестабилазы-Лизоцима-2 ингибировать более чем на 40% АДФ-стимулированную PRP агрегацию тромбоцитов и АДФ-стимулированную агрегацию отмытых тромбоцитов крови лошадей. Заключение. Способность Дестабилазы-Лизоцима-2 ингибировать агрегацию тромбоцитов расширяет биологические свойства рекомбинантного тромболитического фермента, доклинические испытания которого завершились в конце 2015 г.