Ингибирование экспрессии гена LGALS9 активирует Т-клеточно-опосредованную цитотоксичность в опухоли почки

Аннотация

Поиск новых подходов иммунотерапии рака почки является актуальной задачей, решение которой будет способствовать улучшению качества лечения и снижению доли больных с иммуноопосредованными нежелательными явлениями. В этой связи разработка новых лекарственных средств на основе механизма РНК-интерференции представляется одним из перспективных направлений для решения поставленной задачи, в частности для расширения спектра терапевтических мишеней с целью подавления молекулярных механизмов ускользания клеток опухоли от действия иммунного надзора. Одной из таких мишеней является ген LGALS9. Цель исследования – провести анализ уровня экспрессии генов CD274 и LGALS9 в образцах ткани рака почки, полученных от российских больных. Оценить потенциальный эффект ингибирования экспрессии гена LGALS9 в клетках первичной опухоли почки на усиление опосредованного Т-клеточного цитолиза при совместном культивировании.

Методика. Оценку уровня экспрессии генов CD274 и LGALS9 в парных образцах опухоль/норма проводили с использованием количественной ПЦР. Аутологичные Т-лимфоциты выделяли из цельной крови больного, полученной за 2 ч до начала хирургического лечения. Первичную культуру клеток опухоли получали в течение 2-х ч после хирургического лечения. Липосомальный перенос РНК-дуплексов к генам LGALS9 и CD274 проводили за 24 ч до внесения аутологичных Т-лимфоцитов. Цитотоксический эффект оценивали с использованием биосенсорной технологии RTCA хCELLigence (ACEA Biosciences, США) по прошествии 24-х часов совместного культивирования.

Результаты. На выборке из 108 парных образцов показано, что повышение уровня экспрессии гена LGALS9 наблюдается значительно чаще, чем повышение уровня экспрессии гена CD274. Разработанные миРНК к генам LGALS9 и CD274 обеспечили эффективное подавление экспрессии обоих генов. Применение липосомальных препаратов, на основе разработанных миРНК способствовало активации цитотоксических свойств аутологичных Т-лимфоцитов у пациентов, в опухоли которых имела место повышенная экспрессия гена LGALS9. Показано, что опосредованный Т-клеточный цитолиз может быть активирован после внесения в культуру липосомальных комплексов с миРНК к гену LGALS9.

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о терапевтическом потенциале подавления экспрессии гена LGALS9 в клетках опухоли почки для активации цитотоксического действия Т-лимфоцитов.