Патологическая физиология и экспериментальная терапия

Три варианта переноса жирных кислот в форме триглицеридов у плотоядных, травоядных до синтеза инсулина и при действии гормона инсулина

Владимир Николаевич Титов, Вера Алексеевна Амелюшкина, Михаил Юрьевич Карганов — Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Является ли человек всеядным? Биологически это невозможно; Homo sapiens - травояден. В филогенезе же предки человека при жизни в океане, были плотоядными, рыбоядными. В филогенезе, мы полагаем, последовательно с интервалами в миллионы лет сформировались 3 системы переноса к клеткам жирных кислот в форме неполярных триглицеридов в составе апоВ липопротеинов.1. У плотоядных (Carnivore) в океане и на суше: энтероциты, апоЕ/В-48 ХМ→ гепатоциты→ апоВ-100 ЛПОНП→ ЛПНП→ апоВ-100 эндоцитоз. 2. У травоядных (Herbivore), до синтеза инсулина: перенос химически инертной пальмитиновой насыщенных жирных кислот по пути: гепатоциты→ пальмитиновые ЛПОНП→ ЛПНП→ апоВ-100 поглощение клетками. 3. У травоядных (Herbivore) при действии инсулина, перенос химически активной олеиновой мононенасыщенной жирной кислоты наиболее короткий: гепатоциты→ олеиновые ЛПОНП→ апоЕ/В-100 эндоцитоз инсулинзависимыми клетками. На ступенях филогенеза; 1. у плотоядных, 2. у травоядных до синтеза инсулина и 3. у травоядных при действии инсулина: 1. ХМ→ пальмитиновые ЛПОНП→ ЛПНП→ апоВ-100 эндоцитоз; 2. пальмитиновые ЛПОНП→ ЛПНП→апоВ-100 эндоцитоз и 3. олеиновые ЛПОНП→ апоЕ/В-100 эндоцитоз, видно, почему олеиновые ЛПОНП не могут переносить пальмитиновые ЛПОНП с иными физико-химическими свойствами. В инсулинзависимой системе переноса олеиновой мононенасыщенной жирной кислоты, триглицериды задействованы только ЛПОНП и нет ЛПНП. При избытке плотоядной (мясной) пищи и пальмитиновой насыщенной жирной кислоты НЖК клетки не поглощают безлигандные пальмитиновые ЛПОНП→ЛПНП путем апоЕ/В-100 эндоцитоза. Формирование у пациента переноса насыщенных жирных кислот до действия инсулина объективизирует гиперлипопротеинемия (ГЛП) типа IIб. При избыточном потреблении мясной пищи и формировании переноса насыщенных жирных кислот, что характерно для плотоядных, у пациентов выявляется методом электрофореза гиперлипопротеинемия типа V. Атеросклероз и атероматоз, хотя и имеют общие звенья патогенеза, являются биологически разными, последовательными процессами, нарушением биологической функции трофологии и функции эндоэкологии.

Оценка корректирующего влияния сульпирида на поведенческие нарушения алкоголизированных самцов белых крыс с разным уровнем депрессивности

Галина Александровна Фролова — Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Целью исследования является оценка коррекции поведенческих нарушений, вызванных двухнедельной алкоголизацией у самцов белых крыс, путем блокирования сульпиридом ауторецепторов дофамина с учетом индивидуально-типологических особенностей животных. Методика. Эксперимент был выполнен на 40 половозрелых крысах-самцах массой 180 — 220 г. Уровень тревожности крыс определяли в приподнятом крестообразном лабиринте по общему времени пребывания животного на открытом пространстве лабиринта за 5 мин тестирования и числу повторных выходов на него. Двигательную и исследовательскую активность, а также число актов груминга животных оценивали в тесте открытого поля в течение 5 мин. Уровень депрессивности животных устанавливали с помощью теста Порсолта с подсчетом количества и общей продолжительности периодов полной иммобильности (неподвижности) животного. По количеству фекальных болюсов судили об эмоциональности животных. После исходного (контрольного) тестирования в батарее вышеуказанных тестов животные были разделены на три подгруппы согласно выраженности депрессивности в тесте Порсолта. Алкоголизацию проводили в течение 14 сут путем внутрибрюшинного введения раствора этанола в виде 10% раствора из расчета 2 г/кг веса животного, после чего животные проходили повторное тестирование в поведенческих тестах. Сульпирид («Eglonyl», Sanofi Winthrop Industrie, France) вводили в течение 14 сут в дозе 10 мг/кг, внутрибрюшинно, после чего животные снова проходили тестирование. Результаты. Двухнедельная алкоголизация приводит к увеличению тревожности и депрессивности самцов с исходно низким и средним уровнем депрессивности, на что указывает сокращение пребывания животных данных подгрупп на открытом пространстве приподнятого крестообразного лабиринта (p<0,01), уменьшение числа повторных выходов на него (p<0,05) и значительное увеличение общего времени неподвижности в тесте Порсолта (p<0,01). Последующее введение сульпирида корректирует анксиогенный и депрессогенный эффекты алкоголизации у самцов этих подгрупп. Исходно высокодепрессивные животные не проявили чувствительности к 14-дневному введению этанола и последующему блокированию D2/D3-рецепторов дофамина в приподнятом крестообразном лабиринте и тесте Порсолта. Введение этанола в течение 14 дней угнетает исследовательскую активность (p<0,01) самцов в открытом поле независимо от исходного уровня их депрессивности и двигательную (p<0,01) у низкодепрессивных животных. Последующее введение сульпирида не привело к компенсации эффекта алкоголизации на показатели поведенческой активности в открытом поле. У низкодепрессивных самцов на фоне двухнедельной алкоголизации развивается депрессивноподобное состояние, характеризующееся выраженным поведенческим дефицитом в открытом поле. Двухнедельная алкоголизация приводит к значительному (в 2—3,5 раз, p<0,01) росту эмоциональности независимо от исходного уровня депрессивности крыс, что полностью корректируется последующим введением сульпирида у высокодепрессивных самцов, и к частичному снижению проявлений эмоциональности у низко- и среднедепрессивных животных. Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о возможности коррекции тревожных и депрессивных нарушений, возникших на фоне двухнедельной алкоголизации, сульпиридом с учетом индивидуально-типологических особенностей организма.

Влияние ипидакрина на острую боль и развитие невропатического болевого синдрома у крыс линии Вистар

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Цель исследования - изучение особенностей действия ипидакрина («Ипигрикс» Эйч Би Эм Фарма с.р.о., Словакия) на острую боль и динамику развития невропатического болевого синдрома у крыс линии Вистар. Методика. Проведено 2 серии опытов. В 1-й серии влияние ипидакрина изучали на моделях острой боли. Пороги болевой чувствительности определяли до внутримышечного введения ипидакрина (0,5 и 1 мг/кг), а также через 30 и 60 мин после введения. Оценку изменения индивидуальной болевой чувствительности у животных проводили с помощью 2 стандартных тестов: «Tail flick» и «Hot plate». Во 2-й серии изучали влияние ипидакрина на развитие невропатического болевого синдрома, который воспроизводили перерезкой опытным и контрольным животным левого седалищного нерва на уровне подколенной ямки. Интенсивность невропатического болевого синдрома у животных оценивали в баллах по выраженности аутотомии на оперированной конечности, времени появления аутотомий и количеству животных с аутотомией. Внутримышечное введение ипидакрина осуществляли ежедневно (1 мг/кг) в течение 20 сут. Результаты. Введение ипидакрина (0,5 мг/кг) не оказывает антиноцицептивного действия: порог болевой чувствительности не менялся по тестам «Tail flick» и «Hot рlate». Введение ипидакрина (1 мг/кг) за 30 мин до тестирования также не влияло на порог болевой чувствительности по тестам «Tail flick» и «Hot рlate», а через 60 мин после введения ипидакрина порог болевой чувствительности увеличился на 15,8 % (*р=0,033) по тесту «Tail flick» по сравнению с показателем до введения препарата. Заключение. Ипидакрин значительно задерживал развитие невропатического болевого синдрома НБС, но не оказывал влияния на острую боль в тестах «Tail flick» и «Hot plate».

Взаимосвязь уровня гликированного гемоглобина с ритмоинотропной реакцией миокарда больных с ишемической болезнью сердца, ассоциированной с сахарным диабетом 2 типа

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Введение. При сахарном диабете 2 типа повышается риск возникновения нарушений ритма сердца. Вместе с тем, каково значение высокого уровня гипергликемии в изменении возбудимости и нарушении внутриклеточного транспорта ионов кальция кардиомиоцитов недостаточно изучено. Цель. Изучить взаимосвязь уровня гликированного гемоглобина и ритмоинотропной реакцией миокарда больных с ишемической болезнью сердца, ассоциированной с сахарным диабетом. Методика. Работа выполнена на изолированных трабекулах, выделенных из ушек правого предсердия пациентов во время операции коронарного шунтирования. Уровень гликированного гемоглобина (НbА1c) определяли в крови пациентов, взятой до проведения операции. Исследовали инотропную реакцию изолированных трабекул пациентов на экстрасистолические воздействия, оказываемые через 0,2—1,5 с от начала регулярного сокращения в условиях стимуляции с частотой 0,5 Гц. Результаты. Обнаружено, что в исследуемой когорте пациентов клинико-анамнестические показатели были сходны, кроме значений уровня НbА1c. Оказалось, что у пациентов с НbА1c >8% возбудимость миокарда была выше по сравнению с аналогичными параметрами пациентов с уровнем гликированного гемоглобина ниже 8%. Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о том, что у пациентов с уровнем гликированного гемоглобина ниже 8%, сарколеммальная мембрана кардиомиоцитов более электрически стабильна, чем у пациентов с уровнем гликированного гемоглобина выше 8%.

Комбинация низких доз глюкозамина и 2-DG усиливает цитотоксический эффект в опухолевых клетках человека в культуре

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Химиотерапия опухолей традиционно направлена на ингибирование пролиферации раковых клеток и активацию апоптоза. В данной работе на клетках карциномы (линия HeLaG63) и эндотелиоцитах (линия ECV304) человека проведено сравнительное исследование эффектов низких концентраций (1,5—10мМ) двух аналогов глюкозы: 2-DG и глюкозамина D. Оценка эффективности действия этих агентов проводилась по следующим параметрам: снижение жизнеспособности по МТТ-тесту, изменение проницаемости клеточной мембраны, изменение прогрессии по клеточному циклу, выраженность апоптотической гибели при культивировании клеток в питательной среде с различным содержанием глюкозы. Показано, что 48 часовая обработка 2-DG в исследованных концентрациях приводила к снижению доли клеток в G1 и S-фазах и аккумуляции их в G2\M фазах. Глюкозамин D, в отличие от 2-DG при тех же концентрациях блокировал эти же клетки в G1\S фазе клеточного цикла. При обработке клеток HeLaG63 глюкозамин D оказывал более токсичное действие, чем 2-DG. При сочетанном воздействии 2-DG и глюкозамина D регистрировали существенное увеличение суб- G1-популяции по сравнению с раздельным воздействием. Эффективность обработки увеличивалась при снижении концентрации глюкозы в питательной среде и/или с увеличением дозы агентов. Эндотелиоциты (ECV304) были менее чувствительны, как к действию глюкозамина D, так и 2-DG, и сочетанное воздействие даже при концентрациях 10мМ не отличалось от раздельного воздействия. Обработка клеток 10мМ 2-DG и глюкозамина D приводила к увеличению проницаемости клеточных мембран для флуоресцентного красителя пропидиум йодида, при этом наибольшую эффективность регистрировали для клеток HeLaG63.

Влияние Нотромбела на развитие FeCl₃-индуцированного тромбоза сонной артерии крыс

Елена Юрьевна Васина, Светлана Григорьевна Чефу, Николай Николаевич Петрищев — Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Цель работы – изучение влияния Нотромбела (ЗАО «Вертекс», Санкт-Петербург, РФ) на развитие экспериментального тромбоза. Методика. Опыты выполнены на крысах-самцах Вистар массой 250-270 г. Нотромбел вводили внутривенно и интрагастрально в течение 10 сут (курсовая доза 25, 50 и 100 мг/кг). В качестве препаратов сравнения использовали ацетилсалициловую кислоту (АСК) и Клопидогрел (курсовая доза 10,5 и 20 мг/кг соответственно). Тромбоз сонной артерии вызывали 60-секундной аппликацией 20% FeCl₃. Кровоток регистрировали методом высокочастотной ультразвуковой допплерографии («Минимакс-Допплер-К» Санкт-Петербург, РФ, с рабочей частотой датчика 20 МГц). Прекращение кровотока рассматривали как показатель тромбоокклюзии сонной артерии. Результаты. У контрольных крыс через 20-30 мин после аппликации FeCl₃ кровоток в сонной артерии не определялся, что свидетельствовало о развитии тромбоза. Нотромбел как при интрагастральном, так и при внутривенном введении тормозил развитие FeCl₃-индуцированного тромбоза сонной артерии. Наиболее эффективной независимо от способа введения оказалась курсовая доза препарата 100 мг/кг, при которой ни в одном из опытов тромбоз не развивался. Антитромботический эффект Нотромбела сопоставим с эффектами АСК и Клопидогрела. В механизме антитромботического влияния Нотромбела имеют значение его прямое ингибирующее влияние на функциональную активность тромбоцитов, а также антиоксидантная активность. Заключение. Нотромбел можно рассматривать как перспективный антитромботический препарат.

Сравнительный анализ гемопоэтической активности суммарной РНК костного мозга и лимфоидных клеток селезенки при хронической бензольной анемии у крыс

Наталья Викторовна Тишевская, А. Г. Бабаева, Нина Михайловна Геворкян — Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Цель – оценка лечебных свойств суммарной РНК на модели хронической гипопластической анемии, выявление особенностей гемопоэтического действия суммарных РНК, выделенных из костного мозга и лимфоидных клеток селезенки. Методика. Работа выполнена на 36 белых беспородных крысах-самках массой 130-250 г. Хроническую токсическую анемию моделировали подкожным введением смеси химически чистого бензола (0,05 мл/100 г) и стерильного растительного масла. Смесь вводили трижды с интервалом в 7 сут. Контрольным животным (группа 1 в каждой серии) в эти же сроки внутривенно вводили равное по объему количество 0,9% раствора NaCl. Выполнено 2 серии экспериментов. В 1-й серии оценивали гемопоэтическую активность суммарных РНК лимфоидных клеток селезенки, во 2-й — суммарных РНК костного мозга. Препараты суммарной РНК получали из костного мозга и лимфоидных клеток селезенки интактных крыс, а также из клеток тех же органов крыс, подвергнутых кровопусканию (2% от массы тела) за 17 ч до выделения из них РНК. Суммарную РНК выделяли методом гуанидин тиоцианат–фенол–хлороформной экстракции. Для выяснения влияния суммарных РНК на состояние эритроидного ростка костного мозга в препаратах, окрашенных по Паппенгейму, оценивали количественный и качественный состав эритроидных островков. Результаты. Сравнение гемопоэтической активности суммарных РНК, выделенных из костного мозга и лимфоидных клеток селезенки здоровых животных, при их введении крысам с экспериментальной хронической бензольной анемией, показало, что различия клеточного состава лимфоидных органов-источников РНК отражается на их гемопоэтических свойствах. Суммарная РНК из лимфоидных клеток селезенки интактных животных в первую очередь способствует восстановлению количества лейкоцитов, в то время как суммарная РНК лимфоидных клеток костного мозга в начальный период регенерации не оказывает заметного влияния на лейкопоэз. Показано также, что суммарная РНК, выделенная из костного мозга, в целом обеспечивает более интенсивный процесс гемопоэза. Кроме того, обнаружена более высокая эритропоэтическая активность суммарных РНК, выделенных из клеток обоих лимфоидных органов крыс-доноров, стимулированных кровопотерей, по сравнению с таковой суммарных РНК, полученных из органов интактных крыс. Заключение. Подтверждена гемопоэтическая активность суммарной РНК костного мозга и лимфоидных клеток селезенки при гипопластической анемии. Выявлена более высокая эритропоэтическая активность суммарных РНК обоих лимфоидных органов животных после кровопускания по сравнению с их лейкопоэтической активностью.

Роль модификаций липидов тканей печени в патогенезе хирургического эндотоксикоза

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Цель. Оценка роли модификаций липидов тканей печени в ее детоксикационной способности при остром перитоните. Методика. В эксперименте у собак моделировали острый перитонит различной степени тяжести. Степень эндогенной интоксикации оценивали по уровню токсических продуктов гидрофильной и гидрофобной природы. Представлен новый способ оценки детоксикационной функции печени на основе определения уровня токсических продуктов в крови, притекающей к органу и оттекающей от него. Для характеристики качественного и количественного состава липидов из биопсийного материала печени выделяли липиды, осуществляли их фракционирование и денситометрию. Оценивали интенсивность перекисного окисления липидов, активность фосфолипазы А₂ и супероксиддисмутазы. Результаты. Показано, что функциональное состояние печени при хирургическом эндотоксикозе коррелирует с модификацией липидов ее тканевых структур, проявлением чего были существенные изменения состава основных липидов и резкое увеличение хаотропных фракций. Установлена сопряженность изменений состава липидов тканей печени со степенью тяжести патологического процесса. Одними из значимых триггерных механизмов липиддестабилизирующих явлений в тканевых структурах печени являются оксидативный стресс и высокая фосфолипазная активность. При тяжелом течении острого перитонита высока вероятность такого нарушения функционально-метаболического состояния печени, при котором она приобретает самостоятельное патогенетическое значение в продукции токсических субстанций. Заключение. В патогенезе синдрома эндогенной интоксикации при остром перитоните важную патофизиологическую значимость имеет модификация липидов тканей печени, которая является основой острой печеночной недостаточности и формирования нового состояния органа – источника токсинов. Полученные данные определяют векторы патогенетической терапии по предупреждению необратимых повреждений печени с высоким риском неблагоприятного исхода.

Влияние трансдермальной пленки с эритропоэтином на гибель лимфоцитов и процессы свободнорадикального окисления в крови при экспериментальной термической травме у крыс

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Цель – изучение влияния эритропоэтина в составе трансдермальной пленки на характер гибели лимфоцитов и процессы свободнорадикального окисления в крови при экспериментальной термической травме у крыс. Методика. Эксперименты выполнены на 90 белых нелинейных крысах-самцах массой 220±20 г. Животные были случайным образом разделены на 3 группы: группа 1 (n=10) – интактный контроль, группа 2 (n=40) – термическая травма с наложением на область ожога асептической повязки, группа 3 (n=40) – термическая травма с наложением на область ожога трансдермальной пленки с эритропоэтином. Термическую травму ІІІА степени (площадь 3,5% поверхности) воспроизводили под общим наркозом погружением межлопаточной области кожи в очищенную воду (t= 98-99 ºС). Эритропоэтин (42 МЕ/см²) в составе трансдермальной пленки (площадь 12 см²) наносили ежедневно сразу после травмы. Исследование крови проводили на 3-и, 5-е, 8-е и 14-е сут. Гибель лимфоцитов, выделенных из крови на градиенте плотности фиколл-верографин (1,077), оценивали при окрашивании клеток конъюгированным с флюорохромом аннексином V и 7-аминоактиномицином D. Дифференцировали интактные клетки, клетки с ранними признаками апоптоза, клетки с поздними признаками апоптоза и частично некротизированные клетки. Содержание продуктов ПОЛ оценивали спектрофотометрически, определяли активность супероксиддисмутазы в плазме, каталазы в плазме крови и эритроцитах. Результаты. Показано, что при термической травме увеличивается количество лимфоцитов в крови с ранними и поздними признаками апоптоза и некроза, содержание диеновых конъюгатов, кетодиенов и сопряженных триенов, оснований Шиффа в липидных экстрактах плазмы и лимфоцитов, возрастает также активность каталазы в плазме и эритроцитах, активность супероксиддисмутазы в плазме крови снижается. В условиях применения эритропоэтина в составе трансдермальной пленки наблюдается уменьшение количества лимфоцитов с ранними и поздними признаками гибели, снижается активность процессов ПОЛ в плазме и лимфоцитах, а также активность каталазы в плазме и эритроцитах и возрастает активность супероксиддисмутазы в плазме крови. Заключение. Использование эритропоэтина в составе трансдермальной пленки при термической травме снижает выраженность гибели лимфоцитов, активность процессов ПОЛ, повышает активность супероксиддисмутазы в плазме крови по сравнению с группой животных с термической травмой без применения эритропоэтина.

Сравнение токсического действия сферических и игольчатых кальций-фосфатных бионов на поврежденную интиму брюшной аорты крыс

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Цель исследования – оценка токсического действия сферических кальций-фосфатных бионов и игольчатых кальций-фосфатных бионов на предварительно поврежденную интиму аорты крыс. Методика. Токсическое действие сферических кальций-фосфатных бионов и игольчатых кальций-фосфатных бионов на поврежденную интиму брюшной аорты крыс линии Wistar (n = 10 на группу) оценивали путем их однократного внутривенного введения после баллонной ангиопластики с эксплантацией поврежденного участка аорты через 5 нед. Биоптаты анализировали: 1) классическими гистологическими методами (окрашивание гематоксилин-эозином, ализариновым красным, по Вейгерту-ван Гизону и по Расселлу-Мовату); 2) иммунофлюоресцентным окрашиванием криосрезов (сочетанное окрашивание на CD31 и CD34, на CD31 и α-гладкомышечный актин (α-ГМА), на виментин и α-ГМА, на коллаген IV типа и α-ГМА). Для оценки влияния системного воспаления на КФБ-индуцированную эндотелиотоксичность определяли содержание моноцитарного хемоаттрактантного белка (МСР-1/CCL2) и церулоплазмина в сыворотке крови прооперированных крыс посредством иммуноферментного анализа. Результаты. Сферические кальций-фосфатные бионы и игольчатые кальций-фосфатные бионы вызывали выраженную гипертрофию интимы брюшной аорты в 90% (9 из 10 крыс) и 80% случаев (8 из 10 крыс) соответственно, в то время как частота гипертрофии в группе контрольных крыс составила лишь 10% (1 из 10 крыс). Неоинтима при экспозиции интимы брюшной аорты обоим типам бионов характеризовалась переходом фенотипа клеток мезенхимального ряда с контрактильного (α-ГМА-положительные и виментин-отрицательные гладкомышечные клетки) и неактивного (α-ГМА-отрицательные и виментин-положительные фибробласты) на активный синтетический (α-ГМА- и виментин-положительные клетки), что приводило к формированию значительных количеств экстрацеллюлярного матрикса. Внутривенное введение сферических кальций-фосфатных бионов и игольчатых кальций-фосфатных бионов не приводило к изменению уровней МСР-1/CCL2 и церулоплазмина в сыворотке крови, что свидетельствовало об отсутствии их возможного влияния на развитие системного воспалительного ответа. Заключение. Внутривенное введение кальций-фосфатных бионов после повреждения интимы брюшной аорты крыс путем баллонной ангиопластики вызывает развитие гипертрофии интимы, частота и выраженность которой не зависит от формы кальций-фосфатных бионов и которая характеризуется переходом фенотипа клеток мезенхимального ряда из контрактильного/неактивного на активный синтетический. При этом эндотелиотоксическое действие кальций-фосфатных бионов обусловлено их непосредственным воздействием на эндотелий, а не развитием системного воспаления.

Сравнительное исследование влияния ингибитора NOS T1023 и бевацизумаба на рост и морфологию карциномы легких Льюис

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Цель исследования – изучение механизмов противоопухолевой активности ингибитора NOS Т1023 и оценка перспективности его дальнейшей разработки. Методика. В качестве опухолевой модели использована эпидермоидная КЛЛ, штамм которой получен из банка опухолевых материалов ФГБУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина и поддерживался на самцах мышей C₅₇BL_6j. КЛЛ трансплантировали самцам мышей F1 (CBA´C₅₇BL_6j) путем подкожного введения 1,5×10⁶ клеток карциномы в 0,1 мл суспензии на основе среды 199 в область латеральной поверхности правого бедра. Для сравнительной оценки противоопухолевой эффективности использовали ингибитор NOS под шифром Т1023, синтезированный в лаборатории радиационной фармакологии МРНЦ им. А.Ф. Цыба, и VEGF-ингибитор бевацизумаб (БВЗ). Животным первой опытной группы ежедневно, со 2 по 20 сутки вводили соединение Т1023 (60 мг/кг, в/б); второй опытной группы - трижды, на 2, 5 и 10 сут вводили БВЗ (12 мг/кг, в/б); третьей опытной группы — по этим схемам и в таких же дозах вводили и Т1023, и БВЗ (при комбинированном применении Т1023 вводили через 4 ч после введения БВЗ). Контрольным животным в качестве плацебо со 2 по 20 сутки вводили 0,9% раствор натрия хлорида (0,2 мл, в/б). Противоопухолевые эффекты оценивали, сравнивая размеры опухолевых узлов, длительность задержки роста и индекс торможения роста опухоли у контрольных и опытных животных. Гистологические методы исследования включали иммуноокрашивание на PCNA, CD31, пимонидазол и морфометрический анализ микроскопических изображений. Результаты сравнительных исследований показали, что соединение Т1023 и VEGF-ингибитор бевацизумаб (БВЗ) оказывают однонаправленное влияние на карциному легких Льюис (КЛЛ), сопровождающееся торможением роста и подавлением метастазирования неоплазии. Воздействие и Т1023, и БВЗ вызывало снижение содержания сосудов в перитуморальных зонах и в «горячих точках» ангиогенеза, усиливало гипоксию паренхимы КЛЛ и стимулировало апоптоз опухолевых клеток. При комбинированном применении Т1023 и БВЗ их антинеопластическая эффективность в отношении ингибирования ангиогенеза и девитализации опухолевых клеток соответствовала аддитивному действию. Заключение. Результаты позволяют предполагать, что основой противоопухолевой активности Т1023 является антиангиогенное действие и свидетельствуют о перспективности применения ингибиторов NOS в ангиостатической терапии солидных злокачественных новообразований в сочетании с имеющимися антинеоваскулярными средствами.

Роль рецепторов к окситоцину и вазопрессину в патогенезе тазовой боли, обусловленной аденомиозом

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Механизмы, лежащие в основе развития аденомиоз-ассоциированной тазовой боли, на сегодняшний день до конца не раскрыты. Необходим комплексный подход к решению этой проблемы для разработки наиболее эффективных методов диагностики и персонифицированной терапии. Цель исследования – изучить роль рецепторов к окситоцину и вазопрессину в патогенезе тазовой боли при аденомиозе. Методика. Изучено 30 образцов ткани после после гистерэктомий у женщин с диффузным аденомиозом ІІ-ІІІ степени, сопровождающимся болевым синдромом выраженной степени тяжести, и не получавших ранее гормональную терапию. Группа морфологического контроля — 30 биоптатов женщин с аденомиозом, без болевого синдрома, прооперированных по поводу аномальных маточных кровотечений. Эти пациентки также не получали гормональную терапию. Образцы, включавшие эндометрий и миометрий, подвергали стандартным гистологическим процедурам, готовили парафиновые срезы (5 мкм). Общую морфологическую оценку проводили при окраске срезов гематоксилином и эозином. Визуализацию клеток осуществляли после иммуногистохимического окрашивания с использованием моноклональных антител к рецепторам окситоцина и поликлональные антитела к рецепторам вазопрессина. Результаты. По данным морфометрического анализа эпителиальной выстилки эндометриоидных гетеротопий статистически значимых различий в высоте клеток железистого эпителия, диаметре желез и их плотности на единицу площади между исследуемыми группами не установлено. Суммарная плотность иммунологически маркированных рецепторов к окситоцину в очагах аденомиотического поражения составила 73.7±1.8%, в группе морфологического контроля — 35.2±1.4%. В цитоплазме гладкомышечных клеток всех слоев миометрия и сосудов обнаруживали умеренную (2 балла), местами выраженную (3 балла) иммуногистохимическую реакцию к рецепторам вазопрессина – 88,4±2.3%. В группе морфологического контроля в цитоплазме гладкомышечных клеток всех слоев миометрия и сосудов также отмечалась умеренная иммуногистохимическая реакция к рецепторам вазопрессина – 43,2±1.8%. Изменение плотности рецепторов к окситоцину и вазопресину статистически значимы (p <0.05). Заключение. Патогенетически обоснованным механизмом тазовой боли у женщин с диффузным аденомиозом является изменение рецепторной чувствительности тканей миометрия к действию окситоцина и вазопрессина, что может проявляться спонтанными дисперистальтическими сокращениями миометрия спазматического характера.

Реакция децидуальных клеток плаценты при коррекции хламидиоза у женщин во время беременности

Ольга Викторовна Перетятько, Анатолий Степанович Пуликов — Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Цель исследования: оценка влияния антибиотиков на структуру децидуальных клеток плаценты при лечении хламидиоза во время беременности. Методика. Гистологическими методами изучали децидуальные клетки различных зон плаценты от рожениц с неосложненной беременностью и с хламидиозом, пролеченным во время беременности. Препараты готовили стандартным гистологическим методами с окраской гематоксилин-эозином. Гисто-стереометрически определяли большой и малый диаметры децидуальных клеток и ядер, количество децидуальных клеток на мм² площади базальной пластинки и септ. Вычисляли ядерно-цитоплазматическое отношение, объемы децидуальных клеток, их цитоплазмы и ядер. Охарактеризованы клеточные популяции стромальных децидуальных клеток базальной пластинки и септ. Составлены вариационные графики объема ядер децидуальных клеток базальной пластинки и септ. Результаты. Установлено, что антибактериальная терапия действует преимущественно на клетки центральной зоны плаценты, изменяя ядерно-клеточный аппарат децидуальных клеток, при этом клеточно-пролиферативный статус клеток снижается к периферии плаценты, где компенсаторно-приспособительные механизмы децидуальных клеток работают слабо. Это сопровождается ослаблением необходимых иммунных реакций в плаценте. Появление дополнительных мод в графиках объема ядер может свидетельствовать о высокой митотической активности и набухании ядер, что, вероятно, связано с цитотоксическим действием антибактериальных препаратов. Заключение. Использованная схема антибактериальной терапии хламидиоза у беременных оказывает незначительный положительный эффект. Результаты работы могут быть использованы для разработки новых схем лечения хламидиоза во время беременности, с использованием антибактериальных препаратов с более щадящим действием на ядерно-клеточный аппарат децидуальной ткани плаценты.

К вопросу о механизме патогенеза пелиоза печени

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Цель исследования – иммуногистохимическая характеристика пелиоза печени. Методика. Образцы опухолей печени (n=4) изучали с использованием гистологического, гистохимического (импрегнация AgNO₃) и иммуногистохимического методов. В качестве первичных антител использовали антитела к Collagen III, Collagen IV, α-SMA, Ki67, CD31, CD34, β-catenin, CD10 и pCEA (Novocastra, UK). Вторичные антитела – универсальные (HiDef Detectionтм HRP Polymer system, «Cell Marque», США). Интенсивность иммуногистохимической окраски оценивали в баллах: «1+» – 1–(10% клеток), «2+» – (11–50% клеток), «3+» – (≥51% клеток). Результаты представляли в процентах от общего числа иммунопозитивных клеток. Результаты. Гистологическое исследование показало, что стенка кисты представлена склерозированной волокнистой тканью с выраженной мононуклеарной инфильтрацией. В перипортальных трактах отчетливо выражены скопления гемосидерина и обширные зоны ступенчатого некроза. В прилежащей печеночной паренхиме определялись мультифокальные, синусоидальные эктазии с кровяным и/или плазменным содержимым, охватывающие все 3 зоны печеночной дольки. При гистохимическом исследовании в этих образованиях выявлялись ретикулярные волокна без признаков деструкции. При иммунногистохимическом исследовании вдоль синусоидов и выстилки полостей было обнаружено увеличение экспрессии Collagen III, Collagen IV (96.6±0.2% и 97.2±0.3% соответственно) и α-SMA (94%±0,5). Степень экспрессии на CD31 (87.3±0.6%) и CD34 (86.3±0.2%) в эндотелии уменьшалась в направлении от триад к центральной вене. Индекс экспрессии Ki-67 был увеличен в макрофагах (28.3±0.2%) и лимфоцитах (12.3±0.7%) синусоидов. Иммунонегативные реакции на β-catenin, CD10 и pCEA исключали опухолевый рост при пелиозе печени. Заключение. Активный синтез белков экстрацеллюлярного матрикса и пролиферация иммунокомпетентных клеток являются ключевыми процессами в патогенезе пелиоза печени на фоне разрушения эндотелиальных коммуникаций. Использованные методы могут быть полезны в дифференциальной диагностике пелиоза и опухолевых процессов в печени.

Старость без болезней

Александр Александрович Пальцын — Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Наиболее распространенные неинфекционные болезни современного мира: метаболический синдром, диабет 2-го типа, хронические респираторные заболевания, церебро- и кардиоваскулярные болезни, болезнь Альцгеймера и другие деменции, депрессии, опухоли, саркопения, остеопороз имеют общий механизм нарушения гомеостаза — окислительный стресс. Другая, объединяющая эти болезни черта — пожилой и старческий возраст пациентов. Связываются эти характеристики снижением адаптивных способностей организма, развивающемся по мере увеличения числа прожитых лет. Связь, в принципе, неизбежная, но в конкретности поддающаяся, как всё живое, влиянию среды. В статье представлены некоторые наиболее известные приемы создания такой среды (образа жизни), которые могут исключить или отодвинуть (нередко на годы) начало болезней.

Способ выращивания культуры клеток нервной системы кишечника пригодной для тканевой инженерии кишечника

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Лечение синдрома короткой кишки является сложной проблемой в современной медицине. У ряда пациентов существующие методы лечения неэффективны, а трансплантация кишечника показывает неудовлетворительные результаты. Тканевая инженерия тонкой кишки может быть инновационным методом лечения этих пациентов. Одним из ключевых элементов в создании кишки является выращивание нервной системы кишечника. До настоящего времени не описаны культуры нервных клеток, выделенных из нервной системы кишечника, выращенные в трёхмерном матриксе на основе гиалуроновой кислоты. Цель исследования: разработать метод выращивания in vitro взаимодействующих друг с другом клеток нервной системы кишечника в трехмерной среде. Методы: клетки нервной системы кишечника выделялись из кишечника крыс путём препарирования и ферментативного воздействия на мышечный слой тонкой кишки. Далее клетки помещались в трёхмерный матрикс и культивировались в нём в течении нескольких дней. Результаты. Клетки нервной системы кишечника были выделены из крыс и культивировались в трёхмерном матриксе, помещённом в раствор для культур клеток с добавлением специфических факторов роста. Микроскопирование культур клеток на восьмые сутки показало, что нервные клетки активно растут, соединяясь с другими нервными клетками при помощи отростков. Конфокальная микроскопия в сочетании с иммуногистохимическим окрашиванием клеток специфичным маркером нервных клеток показала, что полученные культуры действительно состоят из нервных клеток. Заключение. Разработанный метод позволяет вырастить in vitro живущие и взаимодействующие друг с другом клетки нервной системы кишечника в трехмерной среде. Полученная культура клеток может быть использована для моделирования стенки тонкой кишки путем тканевой инженерии.

Методы моделирования острой ишемии головного мозга: патофизиологическое обоснование выбора и значение для клинической практики

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Одним из основных требований к разработке экспериментальных моделей цереброваскулярных заболеваний является их максимальная приближенность к реальной клинической практике. В работе систематизированы данные по основным методам моделирования острой ишемии головного мозга (ОИГМ), представлена их классификация, анализируются данные о преимуществах и недостатках той или иной модели. Обсуждаются результаты экспериментальных исследований по изучению патогенеза ОИГМ с использованием различных моделей (полной и неполной глобальной, локальной и мультифокальной ишемии) и способов их реализации (перевязка артерий, клипирование, коагуляция, эмболизация и др.). Особое внимание уделяется «стабильности» последствий острого нарушения мозгового кровообращения: необратимых ишемических повреждений головного мозга или обратимых с реперфузией заданной продолжительности. Отмечается, что важное значение в этих исследованиях должно принадлежать современным методам прижизненной визуализации очагов острого ишемического повреждения, что позволяет оценивать динамику патологического процесса. Предлагаемый метод отвечает требованиям гуманного обращения с животными. Подчеркивается, что выбор релевантной модели ОИГМ определяется задачами предстоящего исследования и технологическими ресурсами научной лаборатории.

Экспериментальная модель периимплантита

Пн, 27 май 2019 00:00:00 +0300

Цель исследования — разработка и оценка эффективности экспериментальной модели периимплантита, как осложнения при дентальной имплантации. Методика. Предложена экспериментальная модель для изучения процесса формирования осложнений (периимплантита) после дентальной имплантации. Периимплантит моделировали на белых крысах в 2 этапа. На первом этапе 50 крысам экстрагировали первый моляр верхней челюсти слева. На втором этапе осуществляли имплантацию. Использовали модели - импланты, изготовленные не фабричным способом из чистого титана. Животные были разделены на 2 группы. Основную группу составили 25 крыс с моделированием периимплантита. Периимплантит моделировали путем создания нестабильности положения импланта за счет наложения лигатуры из хлопковой нити на область его шейки. Группу сравнения составили 24 крысы с установкой импланта без моделирования условий для формирования периимплантита. Результаты. Приведено подробное описание модели эксперимента. Результаты оценивали через 12 нед после имплантации. В основной группе периимплантит развился у 86,4% животных (19 из 22), в группе сравнения у 17,4% (4 из 23). Заключение. Предложенный способ является эффективной экспериментальной моделью для формирования периимплантита, что позволяет использовать ее для изучения патофизиологии формирования и оценки различных методов профилактики и лечения данного осложнения.