Патологическая физиология и экспериментальная терапия

Изменение метилирования группы апоптоз-ассоциированных белок-кодирующих генов и генов длинных некодирующих РНК как фактор в нарушении их экспрессии при раке молочной железы

Чт, 26 дек 2024 14:09:08 +0000

Предпосылки и цели. Настоящее исследование было направлено на изучение роли изменений уровня метилирования ДНК и экспрессии мРНК белок-кодирующих генов внутренней системы апоптоза APAF1, BAX и BIM и генов длинных некодирующих РНК (днРНК) ADAMTS9-AS2 и HAND2-AS1 в возникновении и прогрессии рака молочной железы (РМЖ), а также проведение анализа кометилирования и коэкспрессии представителей этих двух групп генов.

Методика. Анализ уровня метилирования проводился методом количественной метил-специфичной ПЦР в реальном времени на выборке из 47 парных (опухоль/прилежащая гистологически нормальная ткань молочной железы) образцов РМЖ. Для оценки уровня экспрессии проводили реакцию обратной транскрипции с последующей амплификацией кДНК с помощью SYBR Green ПЦР в реальном времени. Для оценки значимости различий между исследуемыми группами применяли непараметрический критерий Манна–Уитни для независимых выборок. Различия считали значимыми при р≤0.05.

Результаты. Показано статистически значимое увеличение уровня метилирования всех исследуемых генов и статистически значимое снижение уровня экспрессии генов APAF1 и ADAMTS9-AS2 в опухолевой ткани молочной железы. Выявлены статистически значимые ассоциации уровня метилирования генов BAX, APAF1, HAND2-AS1 и ADAMTS9-AS2 со стадией, гена HAND2-AS1 – с размером опухоли, гена BIM – с наличием метастазов в лимфатических узлах. Также продемонстрирована связь между изменением уровня экспрессии генов BIM и APAF1 и показателями прогрессии РМЖ (стадией и размером опухоли). Показана статистически значимая отрицательная корреляция между изменением статуса метилирования промоторных CpG-островков генов APAF1, BAX и ADAMTS9-AS2 и изменением уровня их экспрессии. Обнаружено ко-метилирование генов: ADAMTS9-AS2 – BIM/APAF1/BAX и HAND2-AS1 – BAX и ко-экспрессия генов ADAMTS9-AS2 – BAX.

Заключение. Полученные данные могут быть использованы для обоснования применения исследуемых в работе генов в качестве маркеров для диагностики и прогноза РМЖ.

Сравнительный анализ тромбобезопасности при использовании транексамовой кислоты и фибрин-мономера на фоне антиагрегантной или фибринолитической терапии в эксперименте

Андрей Павлович Момот, Вячеслав Михайлович Вдовин, Игорь Ильич Шахматов — Сб, 28 дек 2024 13:06:45 +0000

Введение. Тяжелая кровопотеря нередко ведет к смерти и относится к ведущему осложнению обширных травм, объемных операций, различных боевых ранений. Для ее минимизации широко используется транексамовая кислота, вопросы безопасности применения которой, до настоящего времени не сняты. Наряду с этим, рассматривается перспективность использования малых доз фибрин-мономера для управления кровотечением, как с точки зрения эффективности, так и безопасности.

Цель исследования – оценка тромбобезопасности применения транексамовой кислоты в сравнении с фибрин-мономером при индуцированной антиагрегантами или стрептокиназой коагулопатии в эксперименте.

Методика. В экспериментах in vivo сопоставляли протромботический эффект от внутривенного введения транексамовой кислоты (15 мг/кг) и фибрин-мономера (0,25 мг/кг) на двух моделях фармакологически-обусловленной коагулопатии, смоделированной антиагрегантрами (ацетилсалициловая кислота в дозе 2,0 мг/кг, в сочетании с клопидогрелом в дозе 8,0 мг/кг) и стрептокиназой (150 000 МЕ/кг). Оценивали ряд показателей системы гемостаза, данные ротационной тромбоэластометрии и калиброванной тромбографии.

Результаты. Применение транексамовой кислоты на фоне антиагрегантной терапии сопровождалось увеличением уровня маркера тромбиногенеза и фибринолиза – D-димера, при сохранении плотностных характеристик сгустка крови. При ее использовании совместно со стрептокиназой наблюдали увеличение интенсивности генерации тромбина и ускорение образования сгустка крови. В случае замены транексамовой кислоты на фибрин-мономер не было зафиксировано какого-либо видимого влияния последнего на параметры оценки системы гемостаза, а также интегральных методов исследования на обеих воспроизведенных моделях коагулопатии.

Заключение. Транексамовая кислота при системном применении, уменьшая раневую кровопотерю, вызывала формирование гиперкоагуляционного сдвига. Перспективный гемостатический препарат фибрин-мономер, получаемый из плазмы крови, при внутривенном введении также снижал кровопотерю, однако не приводил к появлению признаков тромботической опасности. Таким образом, получены новые данные о потенциальной возможности и безопасности использования фибрин-мономера для управления посттравматическим кровотечением.

Экспериментальная оценка эффективности респираторной поддержки для коррекции токсического отёка лёгких

Сб, 28 дек 2024 13:34:39 +0000

Введение. В качестве подходов к лечению токсического отёка лёгких, вызванного ингаляционной интоксикацией пульмонотоксикантами, рассматривают фармакологическую терапию и респираторную поддержку. При тяжёлых интоксикациях фармакологическая тактика – малоэффективна. Данные об эффективности респираторной поддержки для коррекции токсического отёка лёгких в доступной литературе ограничены.

Цель исследования заключалась в экспериментальной оценке эффективности искусственной вентиляции лёгких с поддержанием положительного давления в конце выдоха у кроликов для коррекции токсического отёка лёгких, вызванного тяжёлой интоксикацией продуктами термодеструкции фторопласта-4, обладающими пульмонотоксическим действием.

Методика. Кроликов подвергали ингаляционной интоксикации продуктами термодеструкции фторопласта-4 в концентрации, соответствующей 2 HLC₅₀ (показатель токсичности продуктов термодеструкции). Затем проводили искусственную вентиляцию лёгких (ИВЛ) и искусственную вентиляцию легких с поддержкой положительного давления в конце выдоха (ПДКВ). Оценивали выживаемость, среднюю продолжительность жизни кроликов, показатели газового состава артериальной крови и сатурацию, выполняли компьютерные томограммы груди и рентгенограммы органов грудной клетки кроликов.

Результаты. Воздействие продуктов термодеструкции фторопласта-4 (2 HLC₅₀) приводило к крайне тяжёлой интоксикации кроликов, при этом токсичность продуктов термодеструкции была обусловлена входящим в их состав перфторизобутиленом, обладающим пульмонотоксическм действием. Проведение ИВЛ не предотвращало формирование токсического отёка лёгких у кроликов. В свою очередь проведение ИВЛ с ПДКВ способствовало увеличению выживаемости кроликов и значимому (p=0,024) увеличению средней продолжительности жизни, по сравнению с животными, не получавшими лечение. У кроликов, не получавших лечение и кроликов, которым выполняли только ИВЛ уже через 5 ч после воздействия определили признаки альвеолярной фазы токсического отёка лёгких, выраженную артериальную гипоксемию и гиперкапнию, в то время как у кроликов, получавших ИВЛ с ПДКВ, выявили признаки только интерстициальной фазы отёка без выраженных нарушений оксигенации. На 7 сут после воздействия у выживших кроликов, получавших в качестве лечения ИВЛ с ПДКВ, нарушений структуры и функции дыхательной системы выявлено не было.

Заключение. Применение ИВЛ с ПДКВ эффективно для коррекции токсического отёка лёгких у кроликов, вызванного крайне тяжёлой интоксикацией продуктами термодеструкции фторопласта-4, содержащими перфторизобутилен, причём защитное действие обусловлено созданием положительного давления в конце выдоха.

Влияние полиаминов бактериального происхождения на продукцию иммуноглобулинов G в культуре мононуклеарных лейкоцитов практически здоровых доноров

Илья Андреевич Морозов, Анатолий Петрович Годовалов , Софья Григорьевна Баяндина — Пн, 30 дек 2024 21:04:03 +0000

Полиамины, синтезируемые микроорганизмами в ходе метаболизма аминокислот, оказывают разносторонний эффект на врожденный иммунитет. Так, путресцин и кадаверин способны ингибировать фагоцитарную активность мононуклеарных лейкоцитов, выполнять роль «скавенджера» гидроксильных радикалов в очаге воспаления. Однако в современной литературе нет однозначных данных касательно влияния полиаминов бактериального происхождения на подсистему адаптивного иммунитета. Цель исследования оценить влияние кадаверина и путресцина на продукцию иммуноглобулина G в культуре мононуклеарных лейкоцитов практически здоровых доноров. Материалы и методы. Объектом исследования служили лейкоциты периферической венозной крови 15 практически здоровых доноров. В качестве В-клеточного стимулятора использовали митоген лаконоса PWM. Кадаверин и путресцин использовали в конечных концентрациях 5, 25, 50, 75 и 100 ммоль/л. По окончании срока инкубации определяли концентрацию иммуноглобулинов G с помощью иммуноферментного метода. Результаты. Выявлена прямая зависимость между концентрацией кадаверина и путресцина в пробах и уровнем иммуноглобулинов G (r=0,92 и r=0,98 соответсвенно, p<0,05). Оба полиамина оказали стимулирующее влияние на продукцию IgG только в концентрациях 75 и 100 ммоль/л. Так, при 75 ммоль/л кадаверина уровень иммуноглобулинов составил 17,8 МЕ на 1 мг белка (p=0,047 к контрольным образцам), а при 100 ммоль/л - 21,8 МЕ на 1 мг белка (p=0,001 к контрольным образцам). При концентрации путресцина 75 ммоль/л уровень иммуноглобулинов составил 18,9 МЕ на 1 мг белка (p=0,004 к контрольным образцам), а при 100 ммоль/л - 20,6 МЕ на 1 мг белка (p=0,003 к контрольным образцам). Заключение. Выявлено, что бактериальные метаболиты путресцин и кадаверин обладают стимулирующим влиянием на продукцию иммуноглобулинов класса G лимфоцитами.

Анализ уровня цитокинов у больных острым бруцеллёзом в оценке системного воспаления

Сб, 28 дек 2024 00:00:00 +0000

Введение. Проблема бруцеллёза на современном этапе обусловливает необходимость изучения патофизиологических особенностей инфекции, в том числе оценки роли про- и противовоспалительных цитокинов в патогенезе заболевания.

Цель исследования – патофизиологическая оценка развития системного воспаления при остром бруцеллёзе на основании определения уровня цитокинов в сыворотке крови.

Методика. Объект исследования – больные с диагнозом «острый бруцеллёз», (n=22), находившиеся на стационарном лечении в инфекционной больнице. Материалом для исследования служила сыворотка крови больных острым бруцеллёзом. Анализ уровня цитокинов (IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, MCP-1, MIP-1β, TNF-α) проводили на мультиплексном анализаторе BIO-PLEX 200 с использованием набора Bio-Plex Pro™ Human Cytokine 17- plex.

Результаты. Отмечено повышение уровня интерлейкинов: ИЛ-1β – 1,43±0,55 пг/мл, ИЛ-5 – 58,03±6,27 пг/мл, ИЛ-7 – 18,58±6,75 пг/мл, ИЛ-10 – 5,63±0,97 пг/мл, ИЛ-12р70 - 27,7±4,26 пг/мл (р≤0,05) в острую фазу заболевания, а также увеличение концентрации гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF) 11,7±3,27 пг/мл, относительно референтных данных (p≤0,05). Результаты исследования свидетельствуют о повышении секреции медиаторов воспаления IL-1β, IL-12р70, способствующих активации нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов крови, впоследствии приводящих к усиленному синтезу G-CSF. Данные цитокины являются ключевыми в инициации клеточно-опосредованного иммунного ответа при бруцеллёзной инфекции. Противовоспалительный цитокин (IL-10), продуцируемый Т-хелперами 2 типа (Th2)) стимулирует секрецию иммуноглобулина (IgE), являясь ключевым регулятором реагин-опосредованного иммунного ответа в патогенезе бруцеллёза. Увеличение продукции маркеров – IL-5, IL-7, связано с активацией адаптивного иммунного ответа при бруцеллезе, направленной на защиту от внутриклеточного патогена.

Заключение. При бруцеллёзной инфекции наблюдается дисбаланс между про- и противовоспалительными звеньями в системе цитокинов. Полученные данные показали, что наиболее диагностически значимыми маркерами в патогенезе заболевания являются – ИЛ-1β, IL-12р70, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF).

Стимуляция естественных механизмов противовирусной защиты в донорской роговице человека на этапе консервации

Сб, 28 дек 2024 00:00:00 +0000

Введение. В настоящем исследовании проводится оценка способности ткани роговицы к активации механизмов врожденного иммунитета для вирусной деконтаминации трансплантата роговицы. На сегодня известно, что вирусная инвазия приводит к активации системы врожденного иммунитета. Однако, данные о способности ткани роговицы к продукции собственных интерферонов ограничены. В связи с этим была сформулирована цель данного исследования. Цель: изучить способность ткани донорской роговицы человека к продукции собственных интерферонов 1 типа (ИФН-α и ИФН-β) в эксперименте in vitro на клеточных культурах кератоцитов и фибробластов.

Методика. Для выполнения данной цели использовались трупные донорские роговицы человека, а также выделенные и культивированные клетки роговицы – кератоциты и фибробласты. В состав культуральной среды опытной группы для активации механизма врожденного иммунитета добавляли индуктор интерферона. Контролем выступали клетки, культивированные в полной ростовой среде. По окончании эксперимента проводили иммуногистохимическое исследование для определения фенотипической трансформации, а также иммуноферментный анализ для обнаружения эндогенных ИФН-α и ИФН-β.

Результаты. В результате проведенной работы установлено, что воздействие ростовой среды с индуктором интерферона в концентрации 1 мг/100 мл на клеточные культуры кератоцитов и фибробластов привело к выработке интерферонов 1 типа (ИФН-α и ИФН-β), при достоверно большем количестве выделенного интерферона в клеточной культуре фибробластов по сравнению с клеточной культурой кератоцитов (p<0,05).

Выводы. Добавление индуктора интерферона в состав ростовой среды на 24 ч приводит к активации механизма врожденного иммунитета в клетках и ткани роговицы, в большей степени – в клеточной культуре фибробластов, при этом не вызывает изменение фенотипа.

Роль оси «микробиота – кишечник – головной мозг» в патогенезе ишемического инсульта

Пн, 30 дек 2024 21:29:27 +0000

Введение. В настоящее время инсульт занимает второе место среди причин смертности и третье место среди причин
инвалидизации населения в мире несмотря на достигнутые успехи в лечении и профилактики, в связи с этим необходимо
определение новых патогенетических мишеней в терапии ишемического инсульта (ИИ). Недавние исследования подчеркивают значительный вклад в патогенез ИИ оси «микробиота-кишечник-головной мозг». Цель работы – провести критический анализ данных о роли оси «микробиота – кишечник – головной мозг» в патогенезе ИИ в рецензируемых источниках, индексированных в базах данных Pubmed и Российского индекса научного цитирования за период 2019-2024 гг. по
ключевым словам: «микробиота кишечника», «ишемический инсульт», «патогенез».
Заключение. Продемонстрировано что ИИ индуцирует кишечный дисбиоз посредством повреждения слизистой оболочки кишечника и кишечного барьера, путем секреции DAMPs, активации TLRs и симпатоадреналовой системы. Условно-патогенная микробиота способна оказывать негативное действие на очаг ишемического повреждения посредством
своих сигнальных молекул и метаболитов, так таких как LPS и ТМАО, снижая синтез SCFA увеличивает синтез провоспалительных цитокинов в зоне ишемии, вызывает фенотипическую поляризацию микроглии до М1, тем самым поддерживая нейровоспаление, кроме того условно-патогенная микробиота запускает кинурениновый метаболический путь, тем
самым снижая синтез мелатонина и его эффекты нейропротекции, опосредованные усиленной экспрессией Bmal1, потенцированием пути Nrf2.

Современные представления о патогенезе ревматоидного артрита.

Анна Яковлевна Рыкунова, Яков Федорович Зверев — Пн, 30 дек 2024 21:44:15 +0000

Обзор посвящен современным представлениям о патофизиологии ревматоидного артрита (РА). Рассмотрены основные звенья аутоиммунного процесса с учетом роли общего эпитопа системы лейкоцитарного антигена человека, значение посттрансляционной модификации ряда белков, главным образом цитруллинирования, а также карбамилирования, ацетилирования, в образовании аутоантител. Особо отмечена роль антигенпрезентирующих клеток, в том числе макрофагов, B-лимфоцитов, дендритных клеток в этом процессе. Обсуждаются значимость клеток врожденного и адаптивного иммунитета, особенно B- и T-клеток, изменения их пролиферации, дифференцировки, а также нарушение баланса хелперных CD4⁺T (Th)-клеток в условиях РА. Рассмотрена важная роль провоспалительных цитокинов и хемокинов в развитии воспалительной реакции синовиальной мембраны пораженных суставов. Подчеркнута важность ряда факторов транскрипции, воздействующих на процессы внутриклеточной сигнальной трансдукции и обеспечивающих динамику аутоиммунного воспаления. Отдельно проанализирована значимость рекрутированных и резидентных синовиальных фибробластов в развитии пролиферативного воспаления с образованием паннуса и последующим воздействием на хрящевую и костную ткань. Обсуждаются механизмы разрушения этих тканей, роль активированных хондроцитов, остеокластов и внутриклеточных биохимических каскадов в обеспечении этого патологического процесса. Особый акцент сделан на развитии локальной гипоксии, как одного из важнейших факторов патогенеза РА. Описаны причины возникновения гипоксии, подчеркивается особая роль фактора транскрипции HIF-1α и его связь с другими участниками патологического процесса при РА, такими как внутриклеточные сигнальные каскады NF-κB, JAK/STAT, PI3K-AKT, Notch. Обсуждается энергетический дисбаланс, возникающий в условиях гипоксии, что обусловливает развитие митохондриальной дисфункции, имеющей важное значение в патогенезе РА, что будет рассмотрено во второй части обзора.

A Некоторые особенности адаптивного иммунитета у пациентов с пеpитонитом.

Пн, 30 дек 2024 21:59:58 +0000

Обзоp посвящен особенностям каскадных взаимодействий звеньев иммунной системы пpи pазвитии острого воспаления брюшины. Отpажены особенности цитокиновой активности, альтеpнатива pегуляции интенсивности иммунного ответа посpедством контpольных иммунных точек, особенности взаимодействий нейтоpофилов и pоль экстpаклеточных нейтpофильpных ловушек в pазвитии адаптивного иммунного ответа. Пpиведены сведения о динамике pазвития состояния микpоциpкулятоpного pусла в начале заболевания. Особенности затяжного и осложненного течения pаспpостpанённого гнойного пеpитонита обусловлены особенностями pеакции вpождённого и адаптивного иммунитета, гипеpактивации и инеpтности пpоцессов воспаления в паpиетальной и висцеpальной бpюшине. Патоген имеет лишь пусковое значение. Пpи этом пpоведённое опеpативное вмешательство не может полностью нивелиpовать патомоpфологические пpоцессы в висцеpальной и паpиетальной бpюшине, котоpые имеют инеpционный хаpактеp. Необходимо отметить, что избыточная активация и особенности механизмов pегуляции иммунного ответа, такие как коингибиpующие и коактивиpующие иммунные точки, избыточный выбpос пpовоспалительных цитокинов, дисфункция пpотивовоспалительных цитокинов, несёт в себе элемент аутоагpессии, тем самым усиливая дестpукцию тканей. Вне всякого сомнения, изучение роли вышепеpечисленных маpкёpов и особенностей иммунитета позволит получить новые звенья патогенеза, на основе котоpых появится возможность пpогнозиpовать ваpианты течения пеpитонита и его отдалённых последствий.

Воспаление как характеристика здоровья и болезни: как найти баланс? (Информация о 16-м Всемирном конгрессе по воспалению (WCI2024))

Пн, 30 дек 2024 22:27:56 +0000

Представлена краткая информация о 16-м Всемирном конгрессе по воспалению (WCI 2024), который проходил в Квебеке (Канада) с 21 по 24 июля 2024 г. Освещены последние достижения фундаментальной медицины в области воспаления, продемонстрированы результаты оригинальных, трансляционных и клинических исследований, обсуждены практические аспекты применения новых диагностических стратегий и терапевтических подходов. Были представлены новейшие разработки в области фундаментальных, трансляционных и клинических исследований воспаления, включая клеточную биологию, передачу сигналов, генетику, воспалительные/аутоиммунные заболевания, новые биомаркёры и новые терапевтические подходы к воспалительным болезням человека. Описаны направления исследований ведущих научных групп и национальных обществ различных стран по изучению механизмов развития воспалительной патологии.