Взаимосвязь проонкогенных микроРНК (-21, -221, -222) и опухоль-супрессирующей микроРНК-429 лимфы со структурой тимуса при химиотерапии и оперативном лечении рака молочной железы

Аннотация

Введение. Изучение взаимосвязи уровня микроРНК в лимфе с функциональной активностью тимуса может иметь важное значение для понимания участия микроРНК в регуляции иммунного ответа. Цель исследования – выявление взаимосвязи структур тимуса с уровнями микроРНК (-21, -221, -222, -429) лимфы грудного протока крыс-самок Вистар при оперативном лечении рака молочной железы (РМЖ) и оперативном лечении РМЖ c последующей химиотерапией (по схеме ЦМФ). Методика. РМЖ моделировли 5-кратным с интервалом 7 сут подкожным введением N-метил-N-нитрозомочевины (Sigma). Прижизненный забор лимфы у животных осуществлялся (под наркозом) из цистерны грудного лимфатического протока. Тотальную РНК выделяли из лимфы с использованием набора реагентов «Вектор-Бест» по инструкции производителя. Для получения кДНК проводили обратную транскрипцию (ОТ) по матрице микроРНК. Для определения уровней проонкогенных микроРНК-21, микроРНК-221, микроРНК-222 и опухоль-супрессирующей микроРНК-429 в биологических образцах проводили ОТ-ПЦР в реальном времени на амплификаторе CFX96 (Bio-Rad Lab), в качестве гена сравнения использовали малую РНК U6 («Вектор-Бест»). В разных структурных зонах тимуса подсчитывали абсолютное количество клеток на стандартной площади 2025 мкм2. Взаимосвязь структуры тимуса с уровнями микроРНК (-21, -221, -222, -429) оценивали по коэффициенту ранговой корреляции Спирмена. Результаты. После оперативного лечения РМЖ уровни проонкогенных микроРНК (-21, -222) в лимфе уменьшаются, а опухоль-супрессирующей микроРНК-42РМЖ9 увеличивается по сравнению с РМЖ без лечения. Выявлена взаимосвязь микроРНК-221 с иммунобластами коркового вещества тимуса, где увеличено количество средних и малых лимфоцитов по сравнению с РМЖ без лечения. Установлена взаимосвязь микроРНК-21 со средними лимфоцитами кортико-медуллярной зоны. Во всех исследуемых зонах уменьшено количество клеток с пикнотичными ядрами и увеличено число макрофагов и эпителиоретикулярных клеток. После резекции РМЖ с ХТ уровни микроРНК-221 и микроРНК-429 снижены по сравнению с оперативным лечением РМЖ. Выявлены корреляции: в субкапсулярной зоне коркового вещества – малых лимфоцитов с микроРНК(-221, -429) и митотически делящихся клеток с микроРНК-429; в центральной части коркового вещества – малых лимфоцитов с микроРНК(-221, -429); клеток с пикнотичными ядрами с микроРНК-222; средних лимфоцитов с микроРНК-429; в кортико-медуллярной зоне – средних лимфоцитов с микроРНК(-21, -221); в центральной части мозгового вещества – малых лимфоцитов с микроРНК(-21, -429). Заключение. После оперативного лечения РМЖ и химиотерапии, по сравнению только с резекцией РМЖ, выявленные взаимосвязи клеток структурных компонентов тимуса с проонкогенными и опухоль-супрессирующей микроРНК в корковом и мозговом веществе тимуса могут быть обусловлены повышенной пролиферативной активностью, миграцией Т-лимфоцитов из тимуса, усилением цитотоксических механизмов иммунного ответа, увеличением количества гибнущих клеток.