Эритросомы – получение и поглощение эндотелиоцитами in vitro

Аннотация

Аннотация Введение. Многие болезни человека патогенетически связаны с дисфункцией эндотелия, что мотивирует разрабатывать лекарственные препараты воздействующие на эндотелиоциты. Для решения задачи разработки терапии нацеленной на эндотелий предлагается использовать методы наномедицины, а именно создание наноразмерных структур доставляющих лекарственный препарат в эндотелиоциты. Перспективным кандидатом на роль нетоксичного, биосовместимого носителя лекарственных препаратов в эндотелиоциты являются нановезикулы из мембран эритроцитов человека. Цель работы – разработка технологии получения наноразмерных везикул мембран эритроцитов человека загруженных модельным соединением, и изучение поглощения полученных везикул эндотелием на модели in vitro. Методика. Методом гипотонического гемолиза получали эритроцитарные тени, загружали мембранонепроницаемым флуорецирующим красителем, восстанавливали изотоничность среды и ультразвуковой гомогенизацией получали эритроцитарные наноразмерные везикулы, которые затем отмывали методом диализа или ультрацентрифугирования. Характеризовали полученные эритросомы методами фотонно-корреляционной спектроскопии и просвечивающей электронной микроскопии с обратным контрастом. Изучали поглощение полученных эритросом клетками линии EA.Hy926 с использованием метода проточной цитофлуориметрии и оценивали цитотоксичность эритросом в МТТ-тесте. Результаты. Получены и охарактеризованы препараты эритросом - наноразмерных везикул из замкнутых теней эритроцитов. Показано, что эритросомы загруженные мембранонепроницаемыми флуоресцирующими красителями поглощаются клетками линии эндотелиоцитов EA.Hy926, рассматриваемыми как модель эндотелия In Vitro. Транспорт эритросом в эндотелиоциты является энергозависимым, т. к. блокируется при 4ºС. Эритросомы не оказывают цитотоксическое действие. Заключение. Разработана простая и технологичная методика получения из мембран эритроцитов человека наноразмерных везикул загруженных модельным соединением и поглощаемые клетками эндотелиоцитов, что позволяет рассматривать полученные эритросомы как перспективные средства доставки лекарственных препаратов в эндотелий.