Создание цибридных клеточных культур, содержащих однонуклеотидную замену в гене MT-TL2, ассоциированную с атеросклерозом

  • Маргарита Александровна Сазонова ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», 125315, Москва, Россия, ул. Балтийская, д. 8; ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава России, 121552, Москва, Россия, 3-я Черепковская ул., д. 15а; ФГБОУ ВО «Российский экономический университет им. Г.В. Плеханова», 117997, Москва, Россия, Стремянный переулок, д. 36 http://orcid.org/0000-0002-8610-4593
  • Василий Владимирович Синёв ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», 125315, Москва, Россия, ул. Балтийская, д. 8; ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава России, 121552, Москва, Россия, 3-я Черепковская ул., д. 15а https://orcid.org/0000-0001-5105-5763
  • Анастасия Игоревна Рыжкова ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», 125315, Москва, Россия, ул. Балтийская, д. 8 https://orcid.org/0000-0002-8838-7750
  • Марина Дмитриевна Сазонова ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», 125315, Москва, Россия, ул. Балтийская, д. 8 https://orcid.org/0000-0002-9452-1282
  • Наталья Александровна Дорощук ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава России, 121552, Москва, Россия, 3-я Черепковская ул., д. 15а https://orcid.org/0000-0003-2258-6463
  • Татьяна Валерьевна Кириченко ФГБНУ «Научно-исследовательский институт морфологии человека», 117418, Москва, Россия ул. Цюрупы, д. 3 https://orcid.org/0000-0002-2899-9202
  • Василий Петрович Карагодин ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», 125315, Москва, Россия, ул. Балтийская, д. 8; ФГБОУ ВО «Российский экономический университет им. Г.В. Плеханова», 117997, Москва, Россия, Стремянный переулок, д. 36 https://orcid.org/0000-0003-0501-8499
  • Александр Николаевич Орехов ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», 125315, Москва, Россия, ул. Балтийская, д. 8; Научно-исследовательский институт атеросклероза, Инновационный центр Сколково, 121609, Московская обл., Сколково, Россия, ул. Новая, д. 100; ФГБНУ «Научно-исследовательский институт морфологии человека», 117418, Москва, Россия ул. Цюрупы, д. 3 https://orcid.org/0000-0002-6495-1628
  • Игорь Александрович Собенин ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», 125315, Москва, Россия, ул. Балтийская, д. 8; ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава России, 121552, Москва, Россия, 3-я Черепковская ул., д. 15а https://orcid.org/0000-0003-0978-6444
Ключевые слова: цитоплазматические гибриды, митохондриальный геном, цибриды, мутация, ген MT-TL2, мтДНК, цибридная модель, метод создания цибридов

Аннотация

Введение. Цибридные клеточные модели наиболее перспективны для изучения патогенеза различных заболеваний. Авторами статьи впервые были созданы такие модели для изучения митохондриальной дисфункции и патологических процессов, развивающихся при атеросклерозе.
Цель работы – создание цибридных культур с высоким уровнем гетероплазмии по мутации митохондриального генома m.12315G>A. В предварительных исследованиях авторами статьи было установлено, что пороговый уровень гетероплазмии мутации m.12315G>A ассоциирован с атеросклерозом.
Методика. Цибридные культуры создавали путем слияния безмитохондриальных клеток (rho0) и митохондрий из тромбоцитов участников исследования с высоким уровнем гетероплазмии исследуемых мутаций. Для создания rho0-клеток была взята культура моноцитарного происхождения THP-1. Безмитохондриальные клетки были получены с помощью метода M. Kинга и Г. Аттарди. Тромбоциты выделяли из цельной крови участников исследования. Для этого был применен метод центрифугирования в градиенте плотности фиколла-урографина. Для получения цибридных культур клеток была использована методика «ПЭГ-слияния». В созданных безмитохондриальных и цибридных клеточных культурах был проведен количественный анализ копий митохондриального генома. Согласно результатам данного анализа было подтверждено либо отсутствие митохондрий (rho0-клетки), либо их наличие (цибриды). Количество копий мтДНК детектировалось с помощью реал-тайм ПЦР в присутствии красителя SYBR Green I.
Результаты. Получены 4 цибридные клеточные линии, содержащие мутацию m.12315G>A с уровнем гетероплазмии выше порогового значения.
Заключение. Созданы 4 цибридные культуры с высоким уровнем гетероплазмии по мутации митохондриального генома m.12315G>A. Полученные цибридные клеточные линии могут служить моделями для изучения молекулярно-клеточных механизмов митохондриальной дисфункции при атеросклерозе и других сердечно-сосудистых заболеваниях. Цибридные культуры можно использовать для моделирования атерогенеза, а также для подбора патогенетически обоснованной лекарственной терапии при атеросклерозе.

Скачивания

Данные скачивания пока недоступны.

Биографии авторов

Маргарита Александровна Сазонова, ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», 125315, Москва, Россия, ул. Балтийская, д. 8; ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава России, 121552, Москва, Россия, 3-я Черепковская ул., д. 15а; ФГБОУ ВО «Российский экономический университет им. Г.В. Плеханова», 117997, Москва, Россия, Стремянный переулок, д. 36

– вед. науч. сотр. лаб. ангиопатологии ФГБНУ НИИОПП; ст. науч. сотр. лаб. медицинской генетики ФГБУ «НМИЦ кардиологии» Минздрава России, канд. биол. наук.

Марина Дмитриевна Сазонова, ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», 125315, Москва, Россия, ул. Балтийская, д. 8

– ст. лаборант с в/о лаб. ангиопатологии ФГБНУ НИИОПП.

Опубликован
2020-11-26
Как цитировать
Сазонова М. А., Синёв В. В., Рыжкова А. И., Сазонова М. Д., Дорощук Н. А., Кириченко Т. В., Карагодин В. П., Орехов А. Н., Собенин И. А. Создание цибридных клеточных культур, содержащих однонуклеотидную замену в гене MT-TL2, ассоциированную с атеросклерозом // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2020. Т. 64. № 4. С. 140-147.
Раздел
Методика