Исследование гомоцистеинилирования белков плазмы крови методом капиллярного электрофореза

Аннотация

Цель исследования – апробация и валидация подхода к определению отношения концентраций связанных с белками фракций цистеина и гомоцистеина в плазме крови человека методом капиллярного электрофореза с УФ-детектором. Методика. Белки плазмы крови восстанавливали дитиотреитолом и дериватизировали тиокарбонилдиимидазолом, после чего аналиты очищали от белков ультрафильтрацией. Введение аналитов в капилляр осуществляли электрокинетически. Разделение проводили в кварцевом капилляре длиной 48.5 см и внутренним диаметром 50 мкм, используя 0.2 М ацетат аммония с 25 мкМ гексадецилтриметиламмония бромидом. Результаты. Предел количественного определения по гомоцистеину составил 0.8 мкМ, воспроизводимость соотношения цистеин/гомоцистеин < 5%, время анализа 15 мин. Заключение. Показано, что отношение связанных форм цистеина к гомоцистеину характеризуется теми же закономерностями, что и отношение их общего содержания. Оно имеет довольно высокую степень корреляции с уровнем связанного гомоцистеина и характеризуется меньшей вариабельностью, чем уровень общего гомоцистеина, что дает преимущество его использования для оценки риска развития осложнений сердечно-сосудистых заболеваний.